抗体筛选、肿瘤免疫、CAR-T、NK、TCR-T开发的痛，是该用新技术解决下了！

·   抗体发现下游基因合成、表达昂贵，从而被迫不能大量筛选杂交瘤细胞，又担心不能筛选到高亲和力功能抗体？

·   细胞治疗研发中，担忧因流式荧光的互相干扰，不能高通量筛选抗原靶标，进而未能发现高潜力TCR分子？

·   肿瘤免疫担忧因检测试剂亲和力不足，没能发现高潜力肿瘤特异性抗原？

📣 那么，是时候了解下Immudex公司的Dextramer技术啦！

细胞治疗应用

从靶标发现到临床的CAT-T/TCR-T/NK细胞治疗解决方案

·   多技术叠加，获得亲和力验证的TCR的同时，获取TCR基因序列

·   1000+抗原表位文库，实现高通量筛选

·   GMP级别试剂，监控TCR-T细胞的质量

·   检测APC反应，反向探究抗原表位

应用案例1：高通量，高质量TCR分子的发现

dCODE Dextramerlibraries由带有多达1000+不同抗原表位的dCODE Dextramer分子组成。

dCODE Dextramer单分子由多聚糖骨架，骨架上结合的多个MHC-抗原肽、MHC-抗原肽特异性核酸barcode，以及多个荧光基团组成。其中，dCODE Dextramer文库的不同抗原肽对应不同的核酸barcode。

dCODE Dextramer能够有效检测低亲和力T细胞。该文库与细胞样本孵育一段时间后，可以与目标细胞样本结合。dCODE Dextramer分子由于骨架上连接了多个MHC-抗原肽分子，对亲和力较低的TCR分子也能进行结合，因此在进行流式分选的过程中能筛选得到这些亲和力的T细胞。

筛选获得的细胞，通过单细胞VDJ测序技术解读得到TCR分子的VDJ编码基因。由此整个实验过程即可获得对抗原的亲和力得到验证的TCR分子的核酸序列。

该技术相对于单纯的单细胞VDJ测序技术，进一步验证了该TCR对抗原的亲和力。而相对于单纯的基于多聚体的流式筛选，又获得了后续研究所需的VDJ基因序列。

dCODE Dextramerlibraries筛选TCR分子的流程

应用案例2：GMP级别MHC Dextramer试剂，监控TCR-T细胞的质量

MHC Dextramer试剂结合流式技术，检测TCR-T细胞质量

MHC Dextramer试剂带上靶标抗原和荧光标记分子，与改造后即将用于细胞治疗的TCR-T细胞进行共同孵育，而后进行流式细胞分析。流式结果可根据荧光情况，了解TCR-T细胞中对靶标抗原有亲和力的细胞占比量，从而实现TCR-T质量的快速评估。

肿瘤免疫

肿瘤抗原高灵敏检测研究

·   一份样本中多种肿瘤抗原特异性T细胞识别

·   低亲和力肿瘤特异性CD8+和CD4+ T细胞的检测 

·   高灵敏度，单细胞水平抗原特异性T细胞分析

应用案例：在一份样本中识别多种肿瘤抗原特异性T细胞

Immudex的dCODE Dextramer (HiT) 试剂可一次性检测多种肿瘤特异性抗原，打破传统流式技术因不同荧光互相干扰的局限性。

dCODE Dextramer (HiT) 分子以多聚糖为骨架，并链接多个MHC-肽复合物，能够实现对T细胞受体的高亲和力结合。通过dCODE Dextramer (HiT) 分子上MHC-肽特异性的核酸条形码可区分不同肿瘤抗原，从而可实现针对一个样本的多种肿瘤特异性抗原的panel混合检测。而骨架上的PE荧光团，则对富集低丰度细胞更加有用。

dCODE Dextramer (HiT)试剂的结构

高通量抗原表位发现实验流程

实验过程中，通过流式细胞技术筛选到PE荧光阳性的细胞后，即可通过NGS技术，分析不同肿瘤抗原免疫细胞在整个样本中的占比。后续可挑选肿瘤抗原丰度比较高的细胞，进一步深入研究。

抗体发现

单细胞抗体准确发现

·   多技术叠加，筛选精选B细胞

·   直接获取BCR序列信息

·   缩小目标BCR克隆表达范围，降低下游成本

应用案例：单细胞抗体准确发现

Immudex的dCODE Klickmer系列试剂能够在单细胞水平上识别抗原特异性B细胞，从而加速，准确化抗体发现。

dCODE Klickmer试剂结构

将带有目标抗原protein-X，并且带有一段核酸barcode的dCODE Klickmer的试剂和人的PBMC细胞样本进行孵育。然后通过FACS可以筛选得到对protein-X具有亲和力的B细胞。在收获B细胞后，进一步使用高通量单细胞VDJ测序，可以得到每个细胞BCR分子对应的重排后的VDJ基因序列。基于此，即可精准获得对protein-X具有亲和力的抗体序列编码基因。

在获得抗体序列后，即可通过基因合成克隆该抗体基因，并进行抗体表达生产。该流程相对于传统的杂交瘤技术路线，能更加精准的找到对特定抗原有亲和力的抗体序列，从而节省下游基因合成和克隆表达的成本。

dCODE Klickmer试剂+高通量单细胞VDJ测序技术筛选抗体实验流程

Klickmer试剂，为更多灵活应用提供可能性

为了满足更多定制化应用场景的需求，Immudex还提供仅仅包含多聚糖骨架，配体结合位点，以及荧光基团的Klickmer试剂。通过链霉亲和素偶联等形式。客户可以快速实现配体的装载，从而实现B细胞检测，分子疫苗设计，验证肽与MHC的结合，检测低亲和力的目标、受体或细胞，设计多价、高亲和力的检测分子等应用场景的自主开发。

Klickmer和dCODE Klickmer的分子结构

以上提到的Immudex公司的Dextramer及其衍生技术已经在免疫研究课题的从靶标发现，到生产，到临床的各个环节发挥作用。

对抗体筛选、肿瘤免疫、CAR-T，NK，TCR-T感兴趣的老师，欢迎扫描海报二维码预约厂商交流会~